Без рубрики

Поняття про властивості мікроорганізмів

27.12.2017
Поняття про властивості мікроорганізмів

Поняття про властивості мікроорганізмів

Бактеріологічне дослідження, що застосовується для виявлення патогенних бактерій в матеріалі від хворих тварин або їх трупів, виявлення мікробів в об’єктах зовнішнього середовища, кормах, м’ясі і т. Д. Характер і методика взяття проб, спосіб пересилання матеріалу при різних інфекційних хворобах неоднакові, але існують загальні положення, які необхідно враховувати незалежно від об’єкта дослідження і властивостей матеріалу. Досліджуваний матеріал по можливості збирають в асептичних умовах в стерильну посуд і доставляють в найближчим часом з супровідним документом в лабораторію (в ньому вказані дата взяття, характер і джерело матеріалу, основні клінічні ознаки хвороби і патологоанатомічні зміни, мета дослідження). Бактеріологічне дослідження включає 3 основні методи: мікроскопію (бактеріоскопію) мазків з патологічного або іншого досліджуваного матеріалу; виділення чистої культури бактерій з наступним вивченням морфологічних, культурально-біохімічних, антигенних та патогенних властивостей бактерій.

Бактеріологічне дослідження починають з мікроскопії, що дозволяє виявити в матеріалі мікробів, вивчити їх морфологію (форму, розмір, будова). При мікроскопії патологічного матеріалу готують мазки-відбитки з органів, тканин або тонкі мазки з ін. Досліджуваного матеріалу, висушують їх на повітрі, фіксують (частіше фламбирования) і забарвлюють тим чи іншим методом в залежності від спрямованості дослідження. Для виявлення деяких бактерій (напр., Збудника туберкульозу) патологічний матеріал попередньо обробляють одним з методів збагачення, щоб підвищити в ньому концентрацію бактерій і позбутися від сторонніх мікробів. Для прискореного виявлення бактерії застосовують люмінесцентну мікроскопію. Для вивчення рухливості бактерій, обумовленою наявністю джгутиків, використовують мікроскопію молодий (12-24 год) живої культури за допомогою препаратів висячої краплі або роздавленої краплі. Рухливість бактерій може бути встановлена ​​також на основі особливостей росту культури в напіврідкому МПА.

Виділення культури бактерій проводять шляхом посіву матеріалу на живильні середовища. Щоб полегшити і прискорити виділення бактерій, використовують диференційно-діагностичні та елективні живильні середовища (щільні і рідкі), на яких певні види бактерій дають характерний для них зростання (при цьому затримується ріст сторонніх мікробів). Посів на щільні поживні середовища в бактеріологічних чашках проводять шляхом розтирання шпателем декількох крапель матеріалу по поверхні середовища. При дослідженні паренхіматозних органів убитих або загиблих тварин обпалюють або фламбіруйте шматочок органу, потім надрізають його стерильними ножицями і за допомогою пінцета проводять надрізаної поверхнею по живильному середовищі в чашці. У рідку середу посів матеріалу роблять пастерівської піпеткою. Щоб отримати зростання ізольованих колоній мікробів на щільному середовищі і відокремити досліджувані бактерії від супутніх мікроорганізмів, проводять дрібний посів за методом Дрігальского. Засіяні чашки і пробірки інкубують в термостаті при оптимальній для зростання кожного виду бактерій темп-ре (частіше 37 ° С) протягом 1-2 діб, в деяких випадках (туберкульозні бактерії) — до 3-4 тижнів. Найбільш тривалий і складний етап Б. і.- родова і видова ідентифікація виділених культур. Вивчають тільки чисті культури, отримані після пересіву з однієї колонії і мають ідентичні морфологічні і тинкторіальних властивості. Антигенні властивості культури вивчають в реакції аглютинації. Визначення патогенних властивостей бактерій проводять шляхом зараження лабораторних тварин культурою або фільтратом культури (при визначенні токсінообразованія).

Після вивчення властивостей бактерій зіставляють отримані дані з ознаками бактерій, наявними в класифікаційних схемах або визначниках мікробів, і проводять їх родову і видову диференціацію. У сумнівних випадках проводять повторне дослідження матеріалу. Результати бактеріологічного дослідження записують в реєстраційний журнал або на бланку лабораторної експертизи, в укладанні якої вказують, який мікроб виділений з досліджуваного матеріалу. Діагноз на інфекційну хворобу може бути поставлений тільки при обліку епізоотологічних, клінічних і патологоанатомічних даних.

Культура мікроорганізмів, популяція клітин мікроорганізмів (бактерії, дріжджі, актиноміцети, цвілеві гриби), вирощена в рідкому або на щільному поживному середовищі. Розрізняють чисту і змішану культури. Якщо на живильному середовищі виростають мікроорганізми одного виду, то така культура називається чистою; при наявності росту мікробів двох або більшого числа видів — змішаної. Чистоту культури визначають шляхом мікроскопії мазків, приготовлених з культур в рідкому і на щільною середовищах, враховуючи при цьому однотипність колоній на щільному середовищі, а також на основі вивчення культуральних, біохімічних і антигенних властивостей мікроорганізмів.

Культура бактеріальна — популяція життєздатних бактерій, вирощених на живильному середовищі. Чистий культура бактерій, виділена з до.-л. джерела в певний час, наз. штамом. Найбільш типові штами, що володіють характерними физиол. і біол. властивостями, властивими даному виду бактерій, наз. еталонними і використовуються для порівняння з ними знову виділених культур. Ідентифікація та диференціація бактерій можуть бути проведені лише в тому випадку, коли є чиста культура. Тому при отриманні змішаної культури вдаються до різних методів очищення її від сторонніх мікробів. Еталонні штами застосовують у виробництві діагностичних і імунних препаратів (для виготовлення антигенів, отримання сироваток, вакцин, антитоксинів). Для тривалого зберігання культури бактерій частіше використовують напіврідкий (0,25-0,3%) МПА (до отриманої культурі додають шар стерильного вазелінового масла), мясопептонний печінковий бульйон з вазеліновим маслом і ін. Найбільш надійна збереження культур досягається при їх Ліофільні висушуванні. Правила зберігання культури бактерій і порядок їх відпустки в установи визначені спеціальною інструкцією. На кожен штам бактерій заповнюється паспорт, в якому вказують час і джерело виділення культури, властивості і особливості штаму.

До культуральним або макроморфологіческім властивостей відносяться характерні особливості росту мікроорганізмів на щільних і рідких поживних середовищах. На поверхні щільних поживних середовищ в залежності від посіву мікроорганізми можуть рости у вигляді колоній, штриха або суцільного газону. Колонією називають ізольоване скупчення клітин одного виду, які виросли з однієї клітини (клон клітин). Залежно від того, де росте мікроорганізм (на поверхні щільного поживного середовища, в товщі її), розрізняють поверхневі, глибинні і донні колонії. Колонії, що виросли на поверхні середовища, відрізняються різноманітністю, вони видоспецифічність і їх вивчення використовується для визначення видової приналежності досліджуваної культури.

При описі колоній враховують такі ознаки: форму колонії — округла, амебовідние, різоідная, неправильна і т.д .; розмір (діаметр) колонії — дуже дрібні (точкові) (0,1-0,5 мм), дрібні (0,5-3 мм), середніх розмірів (3-5 мм) і великі (понад 5 мм в діаметрі); поверхню колонії — гладка, шорстка, складчаста, зморшкувата, з концентричними колами або радіально покреслена; профіль колонії — плоский, опуклий, конусоподібний, кратерообразной і т.д .; прозорість — тьмяна, матова, блискуча, прозора, борошниста; колір колонії (пігмент) — безбарвна або пігментована (біла, жовта, золотиста, червона, чорна), особливо відзначають виділення пігменту в середу з її фарбуванням; край колонії — рівний, хвилястий, зубчастий, торочкуватий і т.д .; структура колонії — однорідна, дрібно або грубозерниста, струйчатая; край і структуру колонії визначають за допомогою лупи або на малому збільшенні мікроскопа, помістивши чашку Петрі з посівом на столик мікроскопа кришкою вниз; консистенція колонії — визначають торкаючись до поверхні петлею, колонія може бути щільною, м’якою, вростають в агар, слизової (тягнеться за петлею), тендітної (легко ламається при зіткненні з петлею).

Глибинні колонії найчастіше схожі на більш-менш сплющені чечевички (форма овалів з загостреними кінцями), іноді грудочки вати з ниткоподібними виростами в живильне середовище. Освіта глибинних колоній часто супроводжується розривом щільною середовища, якщо мікроорганізми виділяють газ. Донні колонії мають зазвичай вид тонких прозорих плівок, що стеляться по дну. Опис зростання мікроорганізмів при посіві штрихом включає його особливості: убогий, помірний, рясний; суцільний з рівним або хвилястим краєм; дифузний; перистий; різоідний; деревовидний. Характеризують колір, поверхню, консистенцію. Особливості колонії можуть змінюватися з віком, вони залежать від складу середовища, температури культивування. Зростання мікроорганізмів на рідких поживних середовищах враховують, використовуючи 4-7 добові культури, вирощені в стаціонарних умовах. У рідких поживних середовищах при зростанні мікроорганізмів спостерігається помутніння середовища, освіта плівки або осаду.

Зростання бактерій з рівномірним помутнінням середовища, що характерно для факультативних анаеробів. Ступінь помутніння може бути слабка, помірна, сильна. Придонний зростання бактерій характеризується утворенням осаду: убогого, рясного, пухкого, слизового, пластівчастого, зернистого. Живильне середовище може бути прозорою або мутною.

Пристінковий зростання — освіту зерен, пухких пластівців на внутрішній поверхні стінок посудини. Живильне середовище при цьому залишається прозорою. Поверхневий зростання бактерій характеризується появою на поверхні середовища плівки: тонкої, щільною, пухкої, гладкою, складчастої, вологою, сухий, кільцеподібної, суцільний. Таке зростання спостерігається при культивований ії ае робном бактерій. При зростанні на напіврідких (0,5-0,7% агару) поживних середовищах рухливі мікроби викликають виражене помутніння, нерухомі форми ростуть тільки по ходу посіву уколом в середу.

Нерідко зростання мікробів супроводжується появою запаху, пігментацією середовища, виділенням газу. Характерний запах культур деяких видів бактерій пов’язаний з утворенням різних ефірів (уксусноетіловий, уксусноамілового і ін.), Індолу, меркаптана, сірководню, скатола, аміаку, олійною кислоти. Здатність утворювати пігменти притаманна багатьом видам мікроорганізмів. Хімічна природа пігментів різноманітна: каротиноїди, антоціани, меланіни. Якщо пігмент не розчинний у воді, забарвлюється тільки культуральний наліт, якщо ж він розчинний, забарвлюється і живильне середовище. Вважається, що пігменти захищають бактерії від згубної дії сонячних променів, тому в повітрі так багато пігментованих бактерій, крім того, пігменти беруть участь в обміні речовин цих мікроорганізмів.

У природі існують, так звані, фосфоресцирующие бактерії, культури яких світяться в темряві зеленувато-блакитним або жовтуватим світлом. Такі бактерії зустрічаються, головним чином, у річковій або морській воді. До світиться бактеріям — фотобактеріям — відносяться аеробні бактерії (вібріони, коки, палички).

Тинкторіальні властивості — властивості бактерій, грибів і найпростіших, що характеризують їх здатність вступати в реакцію з барвниками і фарбуватися певним чином. Бактерії мають різноманітну форму і досить складну структуру, визначальну різноманіття їх функціональної діяльності. Для бактерій характерні чотири основні форми: сферична (куляста), циліндрична (паличкоподібна), звита і ниткоподібна. Бактерії кулястої форми — коки — в залежності від площини поділу і розташування відносно один одного окремих особин підрозділяються на мікрококи (окремо що лежать коки), диплококки (парні коки), стрептококи (ланцюжки коків), стафілококи (мають вигляд виноградних грон), тетракоккі (освіти з чотирьох коків) та сарціни (пакети з 8 або 16 коків). Паличкоподібні бактерії розташовуються у вигляді поодиноких клітин, дипло- або стрептобактерій. Покручені форми бактерій — вібріони і спірили, а також спірохети. Вібріони мають вигляд злегка вигнутих паличок, спірили — звиту форму з декількома спіральними завіткамі.окраскі мікроорганізмів використовують основні барвники, які більш інтенсивно зв’язуються кислими компонентами клітини.

З сухих барвників, що продаються у вигляді порошків, готують насичені спиртові розчини, а з них — водно-спиртові, які і служать для фарбування мікробних клітин. Мікроорганізми фарбують, наливаючи барвник на поверхню мазка на певний час. Забарвлення основним фуксином ведуть протягом 2 хв, метиленовим синім — 5-7 хв. Потім мазок промивають водою до тих пір, поки що стікають струменя води не стануть безбарвними, висушують обережним промоканием фільтрувальної папером і проводять мікроскопію в иммерсионной системі. Якщо мазок правильно пофарбований і промитий, то поле зору абсолютно прозоро, а клітини інтенсивно пофарбовані. Існують кілька основних забарвлень: по Граму, за Цілем-Нільсеном, по Ауєскі, Нейссера, Бурі-Гінса.

Ферментативні властивості бактерій обумовлені набором ферментів, відображають певні умови харчування і обміну речовин, властиві даному виду мікроорганізмів в тих чи інших умовах зовнішнього середовища. Бактерії роду Salmonella характеризуються такими ферментативними властивостями: чи не розріджують желатину, розкладають адоніта і не ферментують сахарозу; переважна більшість не розщеплює салицина і не розкладає лактозу, не утворює індолу, що не розщеплює сечовину, не дає реакції Фогес-Проскауера (реакція на ацетілметілкар-бінол); ферментує (за невеликим винятком мальтозу, маніт, сорбіт, розщеплює глюкозу з утворенням газу (S. typhi, S. pullorum зазвичай не утворюють газу); дає позитивну реакцію з метиловим червоним, утилізує амоній і редукує нітрати; більшість з них продукує сірководень.

Для вивчення ферментативних властивостей бактерій роду Salmonella зазвичай використовують короткий кольоровий (строкатий) ряд, що складається з середовищ з глюкозою, манітом, арабінозою, дульцітом, рамнозою (середа Біттера); гліцерінофуксіновий бульйон (бульйон Штерна). Крім зазначених середовищ для диференціації серологічних типів сальмонел використовують також середовища з мальтозою, інозитом, трегалозу, ксилозой; лакмусовое молоко (зміна лакмусового молока при зростанні сальмонел дозволяє їх диференціювати за здатністю утворювати кислоту або луг). Замість лакмусового можна використовувати знежирене молоко з індикатором бромтимоловим синім (1 мл 0,4% -ного розчину в 100 мл молока). Відоме значення для диференціації сальмонел має освіту сірководню культурою. Протеолітичні властивості досліджують шляхом посіву досліджуваної культури сальмонел на МТЖ і молоко.

З огляду на схожість бактерій роду Salmonella з іншими мікроорганізмами родини Enterobacteriaceae виникає необхідність їх диференціації. В даний час в бактеріологічній практиці широко використовують щільні диференційно-діагностичні поживні середовища з лактозою (середовища Плоскірєва, Ендо, Левіна). За здатністю бактерій ферментувати лактозу гальмонелли відрізняють від часто супутньої Е. сон, тому при дослідженні матеріалу на сальмонели спочатку проводять висів на одну з диференційно середовищ. На цих середовищах E. coli, ферментують лактозу з утворенням кислоти і зміною і пета індикатора, утворює колонії, що відрізняються по цисту від колоній сальмонел, що не ферментують лактозу. На середовищі Ендо бактерії E. coli дають колонії червоного кольору, часто з металевим блиском, сальмонелли- безбарвні або блідо-рожеві (пофарбовані в колір середовища); на середовищі Плоскірєва E. coli — колонії оранжево-червоного кольору, сальмонели — прозорі пли ніжно-рожеві; на середовищі Левіна E. coli формують колонії чорного кольору, оточені обідком, сальмонелли- прозорі, ніжно-рожеві або рожево-фіолетові. Для диференціації сальмонел і культурально подібних штамів, а також бактерій роду Proteus і бактерій групи кишкових паличок застосовують середовища з сечовиною (середа Прейс, Ресселя, Олькеницкого), SS-arap (Salmonella — Shigella — агар) і ін. Колір цих середовищ обумовлений неоднаковою інтенсивністю розщеплення мікроорганізмами азотистих речовин з утворенням лужних продуктів. Бактерії групи кишкових паличок і Proteus (за винятком 0-форми), як правило, на SS-arape не дають зростання, а сальмонели ростуть у вигляді ніжних, безбарвних колоній.

Щільні диференційно-діагностичні середовища служать лише для визначення приналежності бактерій до роду Salmonella і відділення їх від супутньої мікрофлори. Для найбільш ефективного виділення сальмонел з патологічного матеріалу, що містить велику (кількість супутньої мікрофлори, що перешкоджає їх росту, використовують спеціальні середовища збагачення (Мюллера, Кауфмана та ін.). Тетратіоновий натрій, що додається в середу Мюллера, пригнічує ріст бактерій групи кишкових паличок, але не перешкоджає розвитку сальмонел. З-поміж Кауфмана є модифікованою середу Мюллера, до якої додані зеленка і натуральна бичача жовч. Ці компоненти затримують ро ст бактерій групи кишкових паличок і особливо протеуса, але сприяють зростанню сальмонел. Ферментатівниє властивості сальмонел не завжди стабільні і можуть змінюватися в залежності від умов зовнішнього середовища, тому правильне тіпізірованія сальмонел можливо лише в результаті вивчення комплексу морфологічних, культуральних, ферментативних властивостей і антигенної структури.

Джерело: Поняття про властивості мікроорганізмів

Поняття про властивості мікроорганізмів

Також ви можете прочитати